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鼠抗蓖麻毒素單克隆抗體的相關知識,快來看看

點擊次數:303  發布時間:2020-11-25
   蓖麻毒素是一種植物蛋白毒素,其來源廣泛,毒性大,產率高,容易制備,可大量生產??赡艹蔀橐环N潛在的軍用毒劑。蓖麻毒素相對分子質量約為64000,具有免疫原性,經減毒后即可在動物體內產生相應的抗體。
  鼠抗蓖麻毒素單克隆抗體并鑒定其特性.方法以甲醛處理的蓖麻毒素毒蛋白為抗原免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾細胞與Sp2/0骨髓瘤細胞融合,經間接ELISA法篩選、融合細胞有限稀釋法克隆、克隆化雜交瘤細胞株的亞類鑒定等方法篩選出單克隆抗體雜交瘤細胞株,用雜交瘤細胞株誘生小鼠腹水,應用蛋白A親和層析法進行單抗的純化,并對鼠抗蓖麻毒素單克隆抗體的特異性進行鑒定。
  根據蓖麻毒素的作用機制,可以從抗體及小分子拮抗劑方面阻斷蓖麻毒素發揮其毒性作用。文獻報道抗蓖麻毒素B鏈的抗體可以通過阻斷蓖麻毒素與細胞表面半乳糖受體的結合,從而阻斷蓖麻毒素進入細胞,抗蓖麻毒素A鏈的抗體能夠通過與N_糖苷酶的活性位點特異結合,阻斷蓖麻毒素A鏈的RNA酶的活性,防止其酶解RNA,進而阻止其發揮細胞毒性作用,故此可以作為良好的Ricin中毒后的解毒劑。到目前為止,文獻中提到的具有中和活性的Ricin抗體所識別的表位均處于A鏈或B鏈上相應的活性位點中。本文的抗蓖麻毒素A鏈單克隆抗體所識別的表位均處于A鏈的活性位點以外,但在體內外均有針對蓖麻毒素的中和保護作用。
  為了建立免疫層析技術定量檢測蓖麻毒素試劑,首先依據蓖麻毒素對半乳糖的特異性結合能力,采用親和層析技術對蓖麻種子進行親和層析純化;其次采用凝膠過濾層析技術,獲得更純的天然蓖麻毒素純品;后以天然的蓖麻毒素脫毒為免疫原,分別免疫獲得鼠抗相思中毒素單克隆抗體和兔抗蓖麻毒素多克隆抗體,利用獲得的鼠抗蓖麻毒素單克隆抗體作為標記抗體。
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