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一文帶你了解鼠抗赭曲霉毒素A單克隆抗體的制備過程

點擊次數:47  發布時間:2022-03-16
  鼠抗赭曲霉毒素A單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備,將具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群,從根本上解決了在抗體制備中長期存在的特異性和可重復性問題,可直接用于疾病的診斷、預防、治療以及免疫機制的研究。
 
  鼠抗赭曲霉毒素A單克隆抗體的制備過程:
 
  1、免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的過程。一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠,按照預先制定的免疫方案進行免疫注射??乖ㄟ^血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官,刺激相應B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。
 
  2、細胞融合采用眼球摘除放血法處死小鼠,無菌操作取出脾臟,在平皿內擠壓研磨,制備脾細胞懸液。將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合,形成雜交瘤細胞。
 
  3、選擇性培養選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞,一般采用HAT選擇性培養基。只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了次鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶,并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性,因此能在HAT培養基中存活和增殖。
 
  4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化在HAT培養基中生長的雜交瘤細胞,只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞,因此,必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養。
 
  5、單克隆抗體的大量制備單克隆抗體的大量制備重要采用動物體內誘生法和體外培養法。
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