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小鼠抗血清ELISA效價測定檢測試劑盒說明書

型 號

產品時間2021-12-14

所屬分類動物疫病試劑盒

報價

產品描述:小鼠抗血清ELISA效價測定檢測試劑盒說明書配液: 洗滌工作液
用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進行稀釋,用于酶標板的洗滌,洗滌工作液在4℃環境可保存一個月,用前一天取出回溫。

產品概述

小鼠抗血清ELISA效價測定檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量

檢測血清效價。

二、適用范圍

定量檢測動物血清的效價。

三、所需材料

儀器微孔板酶標儀450 nm/630 nm、均質器、振蕩器、離心機、天平(感量0.01 g、離心管(5 mL, 50 mL

微量移液器:單道 1µL10 µL、10 µL100µL

多道 50µL300µL

試劑:去離子水

小鼠抗血清ELISA效價測定檢測試劑盒說明書

五、 試劑盒組成

 

序號

組成部分

96T裝量

1

酶標板自備

12×8

2

酶標物

13 mL

3

底物A

7 mL

4

底物B

7 mL

5

終 止 液

7 mL

6

20×濃縮洗滌液

40 mL

7

血清稀釋液

40 mL

六、溶液配制

配液: 洗滌工作液

   用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進行稀釋,用于酶標板的洗滌,洗滌工作液在4℃環境可保存一個月,用前一天取出回溫。

七、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知:

① 處理完的樣品應及時進行下步檢測,實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

② 樣本數目超過8個時推薦使用排槍加樣。

血清(稀釋倍數:1000、2000、5000、10000

① 取血清按以上稀釋倍數依次稀釋1000、2000、5000、10000混勻;

100μL用于分析。

、 酶標免疫測定程序

① 將所有所需試劑從冷藏環境中取出,待其完全回升至室溫后方可使用,根據體積大小不同取出回溫的時間從1小時~2小時。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

②  按標血清稀釋液和樣品雙孔平行的數量使用微孔。

③  加血清稀釋液/血清:加血清稀釋液/血清100µL 到對應的微孔中,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置37避光環境中反應30min。

④  洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內液體甩干,

加入洗滌工作液300 µL/孔,每次靜置20s,甩去孔內液體,重復洗滌3次,最后一次用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。

⑤ 加酶標物:加入酶標物100 µL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置37避光孵育30 min。

⑥ .甩干孔內液體,重復洗板3次,最后一次用吸水紙拍干。

⑦ 顯色:加入底物液A50 µL/孔,再加底物    

B50 µL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置37避光環境中反應10min。

⑧ 測定:加入終止液50µL/孔,用酶標儀立即  測定450/630nm處的吸光度值。

、 結果判定

OD1.0標準。

血清稀釋倍數2000OD1.0的判斷為低效價,血清稀釋倍數2000~5000OD1.0的為中等效價,血清稀釋倍數5000OD1.0的為高等效價(詳見試劑盒專業分析軟件,以便進行大量樣本的分析計算。)

、 注意事項

① 根據體積大小不同取出回溫的時間從1小時~3                                                          小時,體積15毫升以上的優先從冷藏環境取出 回溫。

②  洗板拍干后應立即進行下一步操作。

反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

不使用過了有效期的試劑盒,不交換使用不同批號的試劑。

0標準的吸光度(450/630nm)值小于0.5A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為10min即可。若顏色較淺,可延長反應時間到15-20min,反之則減短反應時間。

⑦ 底物液B液長期使用變為淺藍色時,請放心使用,不影響檢測結果。

 未提及樣本請致電本公司技術服務部。

十一、貯藏條件及保存期

    貯藏條件: 28

保 質 期: 12個月

十二、問題與對策      

(見下頁)

 

 

序號

現象

可能原因

解決方法

1

板條不顯色或者無相應數值

試劑使用順序混亂,或操作步驟出錯

嚴格遵循實驗說明重復實驗

使用了不同批次的試劑

確保試劑來自同一試劑盒

板條受潮嚴重

板條要封好,干燥劑失效要及時更換

 

 

 

 

2

 

 

 

OD

 

試劑過期,或者不同的批次混用

查證過期試劑和批次

洗液配制錯誤、洗滌浸泡時間過長

按照說明書要求洗滌,并正確配制洗液

孵育時間過短

按照說明書要求,嚴格計算好時間

試劑污染

確保吸取不同液體更換新的槍頭和盛放器皿

試劑溫度過低

根據試劑體積大小回溫時間相應延長,確保試劑完全回溫

使用錯誤波長讀數,或者酶

標儀失靈

確保450nm波長讀數,檢查酶標儀是否故障

試劑盒處于的條件

使用完畢的部分請立即放回冰箱,勿置于過熱環境時間太長

 

 

3

過高的

背景值或吸光度值

使用了質量差的水配制試劑

使用雙蒸水或去離子水配制試劑

洗滌不當或者洗板機洗板效果不好

增加1-2洗滌,每孔至少加入250μL洗液

酶標儀失靈,如OD值讀數很高而顏色很淺

使用校正微孔板檢查酶標儀,檢查光源

實驗室溫度過高,反應時間過長

測定操作溫度是否合適,時間是否計算正確

試劑混淆,被污染或者配制不當

確保使用正確的試劑,準確配制,避免污染

 

4

 

差異性

加入標準品和樣品的時間不一致

使用多道槍加樣,同種試劑加樣途中不能中斷

多道槍使用不當

校準多道槍,檢查吸嘴是否套緊,確保吸液量一致

洗滌系統出現故障

檢查洗滌系統,保持良好運行

 

 

 

5

 

板與板之間孵育時間相差太大

獨立計時,確保一致的孵育時間

板與板之間不一致的洗滌過程

確保相同的洗滌次數,保證洗滌系統正常運作

使用移液槍不當

檢查移液槍,確保吸取相同液量

試劑和樣品處于不同溫度

確保盒內試劑和樣品液等充分回溫,如果試劑體積較大則需要回溫較長時間。不能用溫水浴回溫樣品

不同批次的試劑混用,或試劑盒過期

試劑不要混用,通常0標準品的OD值小于0.5顯示試劑質量下降

 

 

6

一個或多個標準品數據點出曲線范圍

標準品添加順序混亂,或者放置于錯誤位置

按照說明要求重復實驗,保證標準品添加正確。

標準品被污染或與其他標準品混淆

改用新的標準品,按照由低濃度到高濃度的順序添加標準品

洗滌不一致或者洗滌系統失靈

遵循一如既往的洗滌方式,檢查洗滌系統

加入標準品和試劑的時間不一致

由低到高濃度依次添加標準品,使用多道槍移液

多道槍使用不當

校準多道槍,檢查吸嘴是否套緊,確保吸液量一致

 

 


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