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小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書

型 號

產品時間2021-12-14

所屬分類動物疫病試劑盒

報價

產品描述:小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書樣本前處理:
取適量病料心、肝、腸等組織,于滅菌研缽充分研磨,用PBS按照1:3體積稀釋成均勻乳劑,經10 000rpm離心3 min。

產品概述

小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書

【用途】 用于小鵝瘟病毒核酸的檢測。

試劑

編號

20T

50T

保存

裂解液

4mL

10mL

室溫

A

無水乙醇

4mL

10mL

室溫

去蛋白漂洗液

12mL

28mL

室溫

洗滌液

32mL

77mL

室溫

洗脫液

2mL

5mL

室溫

蛋白酶K

0.2mL

0.5mL

-20

B

PCR反應液

200μL

500μL

-20

引物

40μL

100μL

-20

陽性對照

30μL

30μL

-20

陰性對照

300μL

300μL

-20

DL2000 DNA Marker

20μL

50μL

-20

小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書操作步驟】

1.樣本前處理及核酸提取  

樣本前處理

取適量病料心、肝、腸等組織,于滅菌研缽充分研磨,用PBS按照13體積稀釋成均勻乳劑,10 000rpm離心3 min。

核酸提?。?/span>

(1)取200μL上述樣本離心后上清液和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL離心管,然后加入200μL裂解液,劇烈振蕩。(蛋白酶K開蓋使用后建議存于2-8)混勻5~10秒。

(2)56℃溫浴10分鐘。

(3)在上述離心管中加入200μL無水乙醇,充分振蕩混勻510秒。

(4)將步驟3中混勻的液體轉移至一只套有收集管的純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,棄去套管內液體。

(5)將500μL去蛋白漂洗液加入純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,并棄去套管內液體。

(6)將700μL洗滌液加入純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,并棄去套管內液體。

(7)可選:重復步驟(6)。

(8)再將純化柱放回接液管上,13 000rpm離心1分鐘。

(9)將純化柱移到一只干凈的1.5mL離心管中。

(10)向離心柱內加50μL洗脫液,室溫靜置1分鐘后12 000rpm離心1分鐘,棄純化柱,離心管內液體中含有基因組DNA。提純的基因組DNA如果不立即使用,請保存于-20℃。

2. PCR加樣體系(總體系20 μL將下列試劑加入PCR反應管中。

PCR反應液

引物

10μL

2.0μL

模   板

8μL

(注:陰、陽性對照設立,由試劑盒提供的標準品直接替換“模板"即可。)

3. 反應程序

           94預變性

 5min

           94變性

 30s

           51退火

 30s   34個循環

           72延伸

 30s  

           72延伸             6min

           4

5min

4.

配制1%瓊脂糖凝膠,取PCR產物5uL,加樣于凝膠孔中,同時在相鄰孔加3μl DL2000 DNA Marker,在120v-130v 電壓下,1×TAE液中電泳15-20min,在紫外成像儀下觀察結果。

【結果判定】

   372b左右位置出現擴增帶,核酸檢測為陽性(如圖)。

   372b左右位置未出現擴增帶,核酸檢測為陰性 。                        

                         


1.B使用之前請完全溶解并離心數秒后使用,蛋白酶K開蓋使用后建議保存于2-8℃。

2 反復凍融試劑將降低檢測靈敏度,盡量減少反復凍融。

3 為避免樣本間的交叉污染,模板最后加,加模板時先加陰性對照,再加檢測樣品,最后加陽性對照,有條件的實驗室加模板的移液器應與加其它組份的移液器分開。

4 上機前注意檢查確保反應混合液內無氣泡,且反應管蓋緊。

【生產企業】  

企業名稱:山東綠都生物科技有限公司

生產地址:山東省濱州市經濟開發區黃河二路169號綠都生物工程高科技園

【有效期】本制品有效期為1年,生產日期見包裝內側。

僅供獸醫診斷使用



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