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山羊痘病毒實時熒光PCR檢測試劑盒說明書

型 號

產品時間2021-12-14

所屬分類動物疫病試劑盒

報價

產品描述:山羊痘病毒實時熒光PCR檢測試劑盒說明書樣本前處理:
取適量皮膚丘疹、肺部病變組織、淋巴結,于滅菌研缽充分研磨,用PBS按照1:3體積稀釋成均勻乳劑,經10 000rpm離心3 min。

產品概述

山羊痘病毒實時熒光PCR檢測試劑盒說明書

【用途】 用于山羊痘病毒核酸的檢測。

試劑

編號

20T

50T

保存

裂解液

4mL

10mL

室溫

A

無水乙醇

4mL

10mL

室溫

去蛋白漂洗液

12mL

28mL

室溫

洗滌液

32mL

77mL

室溫

洗脫液

2mL

5mL

室溫

蛋白酶K

0.2mL

0.5mL

-20

B

PCR反應液

200μL

500μL

-20

引物和探針

40μL

100μL

-20

陽性對照

30μL

30μL

-20

滅菌水

300μL

300μL

-20

山羊痘病毒實時熒光PCR檢測試劑盒說明書操作步驟】

1.樣本前處理及核酸提取  

樣本前處理

取適量皮膚丘疹、肺部病變組織、淋巴結,于滅菌研缽充分研磨,用PBS按照13體積稀釋成均勻乳劑,10 000rpm離心3 min。

核酸提?。?/span>

(1)取200μL上述樣本離心后上清液和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL離心管,然后加入200μL裂解液,劇烈振蕩。(蛋白酶K開蓋使用后建議存于2-8)混勻5~10秒。

(2)56℃溫浴10分鐘。

(3)在上述離心管中加入200μL無水乙醇,充分振蕩混勻510秒。

(4)將步驟3中混勻的液體轉移至一只套有收集管的純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,棄去套管內液體。

(5)將500μL去蛋白漂洗液加入純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,并棄去套管內液體。

(6)將700μL洗滌液加入純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,并棄去套管內液體。

(7)可選:重復步驟(6)。

(8)再將純化柱放回接液管上,13 000rpm離心1分鐘。

(9)將純化柱移到一只干凈的1.5mL離心管中。

(10)向離心柱內加50μL洗脫液,室溫靜置1分鐘后12 000rpm離心1分鐘,棄純化柱,離心管內液體中含有基因組DNA。提純的基因組DNA如果不立即使用,請保存于-20℃。

2. 熒光PCR加樣體系(總體系20 μL將下列試劑加入PCR反應管中。

PCR反應液

引物和探針

10μL

2μL

模   板

滅菌水

2μL

6μL

(注:陰、陽性對照設立,由試劑盒提供的陽性對照、滅菌水直接替換“模板"即可。)

 

3. 反應程序

在熒光PCR儀上進行以下反應:95 ℃ 180s,循環95 ℃ 5 s,55 10 s,72 20 s,共45, 每次循環的第步(72 20 s)收集熒光信號(報告基團HEX",淬滅基團BHQ1")。

【結果判定】

1 閾值設定

檢測結束后,根據收集的熒光曲線和 Ct值直接讀取檢測結果,Ct值為每個反應管內的熒光信號達到設定的閾值時所經歷的循環數。閾值設定原則根據儀器噪聲情況進行調整,以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的最高點為準。 

2 質控標準

(1) 陰性對照:無Ct值無擴增曲線。

(2) 陽性對照:Ct值≤30.0,并出現典型的擴增曲線。若陰、陽性對照組結果不成立,則視為無效檢驗。

3 結果描述及判定

陰性  被檢樣品無Ct值且無明顯擴增曲線,判為山羊痘病毒核酸陰性;

陽性  檢測樣品Ct值≤42.0且出現典型的擴增曲線時,判為山羊痘病毒核酸陽性;

可疑  對于Ct值>42.0的樣品且出現典型的擴增曲線或者Ct值≤42.0但無典型的擴增曲線時,應重檢,重檢Ct值≤42.0且出現典型的擴增曲線時判為陽性,其他情況均判為陰性。

【注意事項】

1.B使用之前請完全溶解并離心數秒后使用,蛋白酶K開蓋使用后建議保存于2-8℃。

2 反復凍融試劑將降低檢測靈敏度,盡量減少反復凍融。

3 為避免樣本間的交叉污染,模板最后加,加模板時先加陰性對照,再加檢測樣品,最后加陽性對照,有條件的實驗室加模板的移液器應與加其它組份的移液器分開。

4 上機前注意檢查確保反應混合液內無氣泡,且反應管蓋緊,以免熒光物質泄漏區污染儀器。

【生產企業】   

企業名稱:山東綠都生物科技有限公司

生產地址:山東省濱州市經濟開發區黃河二路169號綠都生物工程高科技園      

【有效期】本制品有效期為1年,生產日期見包裝內側。

 

僅供獸醫診斷使用


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