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牛羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒

型 號

產品時間2021-12-14

所屬分類動物疫病試劑盒

報價

產品描述:牛羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒1、洗滌液配制
將濃縮洗滌液(20×)用蒸餾水或去離子水稀釋成洗滌液(1×),即1份濃縮洗滌液加入19份蒸餾水,配制的洗滌液(1×)作為洗板用。

產品概述

牛羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒          

 使用說明書

【產品名稱】

通用名稱:口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒

英文名稱:Liquid-phase Blocking ELISA Kit for Detecting FMDV Type O Antibodies

【規格】96T×2

牛羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒用途】

檢測牛、羊等血清中的口蹄疫O型抗體,適用于動物疫苗免疫抗體監測。

【儲藏與有效期】28保存,有效期12個月。

 

【主要組份】 

序號

組份名稱

數量

1

FMDV-O抗原包被板

96T×2

2

HRP-OFMD單抗

12mL×1

3

樣品稀釋液

20mL×1

4

FMDV-O陰性對照

1.0mL×1

5

FMDV-O陽性對照

1.0mL×1

6

單組份TMB

12mL×1

7

終止液

12mL×1

8

濃縮洗滌液(20×)

50mL×1

9

說明書

1

【試驗操作】

1、洗滌液配制 

將濃縮洗滌液(20×)用蒸餾水或去離子水稀釋成洗滌液(1×),即1份濃縮洗滌液加入19份蒸餾水,配制的洗滌液(1×)作為洗板用。

 

2、定性檢測方案(單孔定性,每板檢測92份血清樣本)

 

【操作步驟】

2.1加樣:設陰性對照血清(A1B1)和陽性血清(C1D1)2孔,直接加入50ul/孔對照血清;其它為被檢樣品孔,預先在相應孔內加入45ul的稀釋液,接著加入5ul/孔待檢血清;最后,在所有孔內均加入50ulHRP-OFMD單抗,被檢血清即為120稀釋。振蕩,混勻,37℃溫育30分鐘。

2.2TMB底物:用洗滌液洗板3遍,最后一次拍干,加入TMB底物,50ul/孔,37℃溫育15分鐘。

2.3反應終止: 加入終止液,50ul/孔,終止反應。

2.4讀值:酶標儀450nm波長讀數。

 

【計算方法】

2.5阻斷率計算

陰性對照平均值=(OD-A1+OD-B1/2;

陽性對照平均值=(OD+C1+OD+D1/2;

樣品阻斷 PI=[(陰性對照平均值-樣品OD值)/陰性對照平均值]×100%

根據以上公式計算被檢樣品和陽性對照樣品的阻斷率。

   2.6試驗成立

    兩孔陰性對照OD450nm值至少一孔OD值大于0.5;兩孔陽性對照至少一孔的阻斷率大于60%。

【結果判定】

被檢樣品PI≥50%判為口蹄疫病毒O型抗體陽性;PI<50%判為口蹄疫病毒O型抗體陰性。

 

3、檢測方案(每板檢測1020份血清樣本)

 

在使用前,所有的試劑盒組份應恢復到室溫。試劑應輕輕旋轉或振蕩混勻。每個樣品使用一個單獨的吸頭。

3.1樣品稀釋: 取出FMDO抗原包被板,根據不同的需要,選擇圖1或圖2中的一種布局進行操作。圖1為可檢測10份樣品布局圖;圖2為可檢測20份樣品布局圖。每次試驗,每板均需設置陰陽性血清對照及4孔不加血清單抗對照。

以圖1為例操作,A1A10每孔各75µL稀釋液,其它所有孔內各加入50µL的稀釋液。A1A10每孔各加25µL待檢樣品,A1150µL的陽性對照,A1250µL的陰性對照,用排槍吹打混勻(每孔吹打35次),待檢樣品A1A10分別50µL/的量從AH連續2倍稀釋;陽性對照A1150µL/的量從AH連續2倍稀釋;陰性對照A1250µL/的量從AB連續2倍稀釋。待檢樣品在第110列從1:4稀釋至1:512;陽性對照,從1:2稀釋至1:256,由于試劑盒提供的陽性對照已1:4稀釋,則變為從1:8稀釋至1:1024;陰性對照,從1:2稀釋至1:4。

3.2 加入HRPOFMD單抗:樣品稀釋好后,在所有孔內加入50ulHRPOFMD單抗,反應體系即為100µL/。加樣完畢后,所有稀釋度翻倍,待檢樣品從1:81:1024,陽性對照從1:161:2048,陰性對照從1:41:8,貼封板膜,振蕩混勻。將加好樣的ELISA反應板置于37溫育30分鐘。

3.3洗板:230μL±20μL)洗滌液(1×)洗滌板孔,共洗滌3次。每次洗滌后應棄去孔內的液體。在最后一次洗滌液棄去后,將孔中殘留的洗滌液拍干。50μL/孔加入TMB底物,37避光溫育1015min。

3.4讀值: 每孔再加50μL終止液終止反應,立即在450nm波長下讀取OD值。

 

1  96孔板檢測10份樣品布局圖 


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

S1 1:8

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

1:16

1:4

B

1:16










1:32

1:8

C

1:32










1:64

空白

D

1:64










1:128

空白

E

1:128










1:256

 

不加血清單抗

對照

F

1:256










1:512

G

1:512










1:1024

H

1:1024










1:2048

 

2  96孔板檢測20份樣品布局圖 


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

S1 1:16

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

1:16

1:4

B

1:32










1:32

1:8

C

1:64










1:64

空白

D

1:128










1:128

空白

E

S11 1:16

S12

S13

S14

S15

S16

S17

S18

S19

S20

1:256

 

不加血清單抗

對照

F

1:32










1:512

G

1:64










1:1024

H

1:128










1:2048

 

【結果分析】

3.5試驗成立判斷

不加血清單抗對照OD值應在2.0±1.5范圍內;

陽性對照抗體效價不低于1:1024±1滴度;

陰性對照抗體效價應<1:8。

3.6結果判定

不加血清單抗對照4孔,棄去最高和OD值,計算剩余2孔的平均OD值,再除以2,即得50%對照值,該值即為臨界值,表示阻斷50%反應的對照OD值。待檢樣品OD臨界值,判為陰性孔;待檢樣品OD臨界值,判為陽性孔。每份待檢樣品系列梯度稀釋中,陽性孔的最高稀釋倍數即為該待檢樣品的抗體效價。若臨界值處于兩個稀釋孔OD值之間,抗體效價取相鄰陽性孔和陰性孔稀釋倍數的反對數中間值。如臨界值處于1:64(反對數值為1.8)與1:128(反對數值為2.1)之間,則判定該份待檢樣品的抗體效價為1:90(反對數值為1.95)。

抗體效價64,為疫苗免疫合格。

抗體效價計算對照表(反對數值)

抗體效價

Log10(效價)

對照計算

抗體效價

Log10(效價)

對照計算

抗體效價

Log10(效價)

對照計算

1:4

0.6

1:32

1.5

1:256

2.4

1:6

0.75

1:45

1.65

1:360

2.55

1:8

0.9

1:64

1.8

1:512

2.7

1:11

1.05

1:90

1.95

1:720

2.85

1:16

1.2

1:128

2.1

1:1024

3

1:22

1.35

1:180

2.25

1:1440

3.15

 

4、注意事項

4.1 為使您的實驗獲得正確結果,請您在實驗前仔細閱讀本說明書。

4.2 所有試劑使用前恢復至室溫(1826),以免溫度過低影響抗原抗體反應。

4.3實驗前應用溫度計檢查溫箱溫度,溫度過高或過低影響OD值高低。

4.4 包被板反應時嚴禁堆疊放置,應該平鋪且板間有空隙,不要離溫箱壁太近。

4.5實驗所用移液器及設備應定期校準。

4.6采集的樣品要新鮮,并且最好不要溶血。血清標本在28放置不要超過2天,室溫不超過8小時,如需長時間放置應儲存于-20。 

 

僅供獸醫診斷使用    


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