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雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒

型 號

產品時間2021-12-14

所屬分類動物疫病試劑盒

報價

產品描述:雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒取疑似病料(氣管及分泌物、腎臟、肺臟等病毒靶組織),用PBS研磨成1:3懸液,在-20℃凍融1次,經12000 r/min離心3 min,上清液-20 ℃保存備用。

產品概述

雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書

【用途】用于雞傳染性支氣管炎病毒核酸的檢測。

【規格】50T/

【試劑】

編號

數量(50T

保存

SR-I

10mL

室溫

A

SR-II

25mL

室溫

SR-

36mL

室溫

SR-

18mL

室溫

TU-1

3.75mL

室溫

TU-2

2.5mL

室溫

RT-PCR反應液

500uL

-20

B

酶混合液

50uL

-20

引物混合液

100uL

-20

陽性對照

30uL

-20

陰性對照

100uL

-20

ddH2O

1mL

-20

6xDNA Loading buffer

100uL

-20

Marker DL2000

50uL

-20

【操作步驟】

1.雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒核酸提取  

(1) 取疑似病料(氣管及分泌物、腎臟、肺臟等病毒靶組織),用PBS研磨成13懸液,在-20℃凍融1次,經12000 r/min離心3 min,上清液-20 ℃保存備用。

2200uL上清液,移入1.5mL滅菌EP管中,加入200uLSR-I,漩渦振蕩混合均勻,靜置5min。

3)加75uL TU-1,漩渦振蕩混合均勻,12000r/min離心5 min。

4)將上清轉移到新的2 ml離心管(試劑盒內提供)中,加入300 uL SR-,上下倒置6-8次,混合均勻。

5)將步驟4中的混合液移入制備管中(試劑盒內提供),并將制備管置于同一2 ml離心管,8000 r/min離心1min。

6)棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,加500 uL SR-II,室溫靜置1min,12000 r/min離心1 min。

7)棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,加700 uL SR-,12000 r/min離心1 min。

8)將制備管置回到2 ml離心管中,12000 r/min離心2min。

9) 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中(試劑盒內提供),在制備管膜中央加40 uL TU-2, 室溫靜置1 min。12000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板,即用或-20凍存備用。

 

2.One-Step RT- PCR加樣體系(20uL體系)

RT-PCR反應液

10uL

引物混合液

2uL

酶混合液

0.8uL

ddH2O

模板

5.2uL

2uL

 

 

3.反應程序

1

50

45min


2

3

94預變性

94變性

5min

45 s


4

52退火

45 s

34個循環3~5步)

5

72延伸

45 s


6

72延伸

6min


7

4終止

5min


4.電泳

配制1.0%瓊脂糖凝膠,取PCR產物5uL,混合1uL6xDNA Loading buffer,加樣于凝膠孔中,同時在相鄰孔加5uL DL2000 DNA Marker,在120-150v 電壓下,1×TAE液中電泳15-20min,在紫外成像儀下觀察結果。

【結果判定】

在約490bp左右位置出現擴增帶,表明雞傳染性支氣管炎病毒核酸檢測陽性;

若在490bp處沒有條帶出現則樣品判為陰性。

1.標準陽性片段M.DL2000 Marker

【注意事項】

1. 陽性對照極易污染試驗環境,如果做陽性對照,吸取陽性對照槍頭妥善處理

2. -20℃保存的試劑在使用前應完全融化,振蕩混勻后 8000rpm 離心 15 使液體全部沉于管底,置冰盒中取用。嚴禁使用超過有效期限的試劑;嚴禁混用不同試劑盒組分。

3. PCR 實驗室應按功能分為配液區、樣品處理區、擴增區、電泳區。物流方向依次為配液區 →樣品處理區→擴增區→電泳區。所有接觸病料的物品、器具,尤其是陽性對照及PCR 產物和使用后的電泳緩沖液均應合理處置,以免污染實驗室。

4. 嚴格按照國標和說明書要求操作。吸取液體時移液器吸頭盡量在液體上層吸取,移液精確;吸取不同液體時必須更換移液器滴頭,防止試劑組分污染以及樣品污染。

5.試劑盒組分在生產分裝時考慮到液體的損耗,實際裝量略多于標注裝量,因此嚴禁直接在 原包裝中配制反應體系,以免造成反應體系各組分比例不準確。

【保存期】本制品有效期為1年。

 

僅供獸醫診斷使用



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